Monkeypox Virus Real Time PCR Kit
antsipiriany momba ny vokatra
Fampiasana natao
Izy io dia ampiasaina amin'ny fitiliana ny Monkeypox Virus ao amin'ny serum olombelona na santionany exudate lesion amin'ny alàlan'ny fampiasana rafitra PCR tena izy.
Fitsipika fitsapana
Ity vokatra ity dia rafitra fitiliana PCR mifototra amin'ny fluorescent Taqman®.Ny primer sy probe manokana dia natao hamantarana ny fototarazo F3L an'ny Virus Monkeypox.Ny fanaraha-maso anatiny mikendry ny fototarazo voatahiry dia manara-maso ny fanangonana santionany, ny fikarakarana santionany ary ny fizotran'ny PCR amin'ny fotoana tena izy mba hialana amin'ny vokatra ratsy diso.Ny kitapo dia rafitra lyophilized premix tanteraka, izay ahitana fitaovana ilaina amin'ny fitiliana ny otrik'aretina Monkeypox: enzyme amplification asidra nucleic, enzyme UDG, buffer reaction, primer manokana ary probe.
Hevi-dehibe
Ireo singa nomena dia voatanisa ao amin'ny tabilao.
| singa | Package | ilaina |
| Virus MonkeypoxLyophilized Premix | Tube PCR 8 strip× 6 posy | Primers, probe, dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Taq DNA polymerase, UDG Enzyme |
| MPV Positive Control | 400 μL × 1 fantsona | Fitohizan'ny ADN misy fototarazo Target |
| Fanaraha-maso ratsy MPV | 400 μL × 1 fantsona | ADN misy fizarana fototarazo olombelona |
| Famotehana Vahaolana | 1 mL × 1 fantsona | Stabilizer |
| Certificate of Conformity | 1 tapa | / |
Operation Flow
1. Santionanyfanangonana:Ny santionany dia tokony angonina ao anaty fantsona sterile mifanaraka amin'izany
miaraka amin'ny fepetra ara-teknika mahazatra.
2. Fiomanana Reagent (Faritra Fanomanana Reagent)
Esory ireo singa ao amin'ny kitapo, ampifandanjao amin'ny mari-pana amin'ny efitrano ho an'ny fampiasana standby.
3. Fanodinana santionany (Faritra fanodinana santionany)
3.1 Ny fitrandrahana asidra nukleika
Amporisihina ny maka santionany ranon-javatra 200μL, Fanaraha-maso tsara sy fanaraha-maso ratsy ho an'ny fitrandrahana asidra nokleary, araka ny fepetra sy ny fomba fiasa mifandraika amin'ny kitapo fitrandrahana ADN.
3.2 Famotehana vovoka lyophilised sy fanampim-panampiana
Manomàna premix Lyophilized Virus Monkeypox araka ny isan'ny santionany.Ny santionany iray dia mila fantsona PCR iray misy vovoka premix Lyophilized.Ny fanaraha-maso ratsy sy ny fanaraha-maso tsara dia tokony ho raisina ho santionany roa.
(1) Ampio 15μL Dissolving Solution amin'ny tavoahangy PCR tsirairay misy premix Lyophilized, ary ampio 5μL santionany nalaina / Negative Control / Positive Control ao amin'ny fantsona PCR tsirairay.
(2) Sarony mafy ny fantsona PCR, atsofohy amin'ny tanana ny fantsona PCR mandra-pahalevon'ny vovoka lyophilized ary mifangaro, manangona ny rano ho any amin'ny faran'ny fantsona PCR amin'ny alàlan'ny centrifugation haingana haingana.
(3) Raha mampiasa fitaovana PCR Real-time mahazatra ho an'ny fitiliana, dia alefaso mivantana ny fantsona PCR mankany amin'ny faritra amplification;raha mampiasa BTK-8 ho an'ny fitiliana, dia mila manao ireto asa manaraka ireto: famindrana 10 μL ranon-javatra avy amin'ny PCR fantsona ho any amin'ny fanehoan-kevitra Chip tsara ny BTK-8.Ny fantsona PCR iray dia mifanitsy amin'ny lavaka iray eo amin'ny chip.Mandritra ny fiasan'ny pipetting dia ataovy izay hahazoana antoka fa mitsangana 90 degre ny pipette.Ny toro-hevitra pipette sakana aerosol dia tokony hapetraka eo afovoan'ny fantsakana amin'ny hery antonony ary atsaharo ny fanosehana ny pipette rehefa tonga amin'ny fitaovana voalohany (mba hisorohana ny bubbles).Aorian'ny famenoana ireo lavaka fantsakana, esory ny fonon'ny chip fanehoan-kevitra mba handrakotra ny lavadrano rehetra ary afindra any amin'ny faritra misy ny fanamafisam-peo ny puce.
4. Fanamafisana PCR (Faritra hita maso)
4.1 Ampidiro ao anatin'ny fitoeran-tsarimihetsika ireo fantsona PCR/potika fanehoan-kevitra ary apetraho tsara araka ny filaharany ny anaran'ny fanehoan-kevitra tsirairay.
4.2 Fametrahana ny fluorescence fitiliana: (1) virus Monkeypox (FAM);(2) Fanaraha-maso anatiny (CY5).
4.3 Manaova ity protocole manaraka ity
Protocole an'ny ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| DINGANA | hafanana | Time | tsingerina | |
| 1 | Pre-denaturation | 95 ℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Denaturation | 95 ℃ | 10 s | 45 |
| Fanitarana, fanitarana, fahazoana fluorescence | 60 ℃ | 30 s | ||
Protocole an'ny BTK-8:
| DINGANA | hafanana | Time | tsingerina | |
| 1 | Pre-denaturation | 95 ℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Denaturation | 95 ℃ | 5 s | 45 |
| Fanitarana, fanitarana, fahazoana fluorescence | 60 ℃ | 14 s | ||
5. Famakafakana valiny (jereo ny Boky Torolàlana ho an'ny mpampiasa)
Aorian'ny fanehoan-kevitra dia ho voatahiry ho azy ny valiny.Kitiho ny "Analyze" mba hamakafaka, ary ny fitaovana dia handika ho azy ny sanda Ct isaky ny santionany amin'ny tsanganana valiny.Ny vokatra fanaraha-maso ratsy sy tsara dia tokony hifanaraka amin'ireto "6. Fanaraha-maso ny kalitao".
6. Fanaraha-maso kalitao
6.1 Fanaraha-maso ratsy: Tsy misy Ct na Ct> 40 amin'ny fantsona FAM, Ct≤40 amin'ny fantsona CY5 miaraka amin'ny curve amplification mahazatra.
6.2 Fanaraha-maso tsara: Ct≤35 amin'ny fantsona FAM miaraka amin'ny curve amplification mahazatra, Ct≤40 amin'ny fantsona CY5 amin'ny curve amplification mahazatra.
6.3 Manan-kery ny vokatra raha toa ka feno avokoa ireo fepetra voalaza etsy ambony ireo.Raha tsy izany dia tsy mety ny valiny.
Interpretation vokatry
Ireto valiny manaraka ireto dia azo atao:
| Ct sandan'ny fantsona FAM | Ct sandan'ny fantsona CY5 | Interpretation | |
| 1# | Tsy misy Ct na Ct>40 | ≤40 | Monkeypox virus ratsy |
| 2# | ≤40 | Na inona na inona vokatra | Monkeypox virus positive |
| 3# | 40～45 | ≤40 | Re-test;raha mbola 40~45 izany dia tatero ho 1# |
| 4# | Tsy misy Ct na Ct>40 | Tsy misy Ct na Ct>40 | Tsy mety |
FANAMARIHANA: Raha misy valiny tsy mety dia mila angonina sy andrana indray ny santionany.
Information momba ny kaomandy
| Anaran'ny vokatra | Cat.tsy misy | Size | santionany | Fiainana talantalana | Trans.& Sto.Temp. |
| Monkeypox Virus Real Time PCR Kit | B001P-01 | 48 fitsapana/kit | Serum / Lesion Exudate | 12 volana | -25～-15℃ |
